液相色譜-紫外檢測法測定河豚魚、鰻魚中土霉素、四環素、金霉素、強力霉素殘留

[db:作者] / 2022-12-20 00:00

12.2.4.1 適用 范圍

適用于河豚魚、鰻魚中土霉素、四環素、金霉素、強力霉素殘留量的液相色譜紫外法測定。方法檢出限均為0.010 mg/kg。

12.2.4.2方 法原理

用0.1 mol/L Na2EDTA-Mcllvaine (pH=4.0±0.05) 緩沖溶液提取河豚魚、鰻魚中四環素族抗生素殘留，提取液經離心后，上清液用 Oasis HLB固相萃取柱和羧酸型陽離子交換柱凈化，液相色譜-紫外檢測器測定，外標法定量。

12.2.4.3 試劑和材料

甲醇、乙腈、乙酸乙酯、正已烷：色譜純；檸檬酸(C6H8O7·H2O)、磷酸氫二鈉、乙二胺四乙酸二鈉(Na2EDTA·2H2O)、 草酸：分析純；甲酸：優級純。

0.1 mol/L檸檬酸溶液：稱取21.01 g檸檬酸，用水溶解，定容至1000 mL； 0.2 mol/L磷酸氫二鈉溶液：稱取28.41 g磷酸氫二鈉，用水溶解，定容至1000 mL； Mellvaine緩沖溶液：將1000 mL 0.1 mol/L檸檬酸溶液與625 mL 0.2 mol/L磷酸氫二鈉溶液混合，用NaOH或HCI調pH=4.0+0.05； 0.1 mol/L Na2EDTA-Mllvaine緩沖溶液：稱取60.5g乙二胺四乙酸二鈉放入1625 mL mcllvaine緩沖溶液中，使其溶解，搖勻； 0.01 mol/L草酸溶液：稱取1.26 g草酸用水溶解，定容至1000 mL； 2%甲酸溶液：量取2mL甲酸，用水稀釋至1000 mL；甲醇溶液： (1+19，v/v)。 量取5 mL甲醇和95 mL水混合；洗脫液：乙腈-甲醇-0.01 mol/L草酸溶液(2+1+7， v/v/v)。

土霉素、四環素、金霉素、強力霉素標準物質：純度≥95%。

0.1 mg/mL標準儲備溶液：準確稱取適量的土霉素、四環素 、金霉素、強力霉素標準物質，分別用甲醇配成0.1 mg/mL的標準儲備液。儲備液于-18℃貯存。

6.0 μg/mL中間濃度混合標準溶液：分別吸取0.6 mL標準儲備溶液移至10 mL容量瓶中，用甲醇稀釋成6.0 μg/mL的標準混合溶液。該溶液于-18℃貯存。

混合標準工作溶液：用洗脫液將中間濃度混合標準溶液稀釋成0.005μg/mL、0.010μg/mL、0.050 ug/mL、0.100 ug/mL、0.200 ug/mL不同濃度的混合標準工作溶液，混合標準工作溶液需當天配制。

OasisHLB固相萃取柱或相當者：500mg，6mL。使用前分別用5mL甲醇和10mL水預處理，保持柱體濕潤。

陽離子交換柱：羧酸型，500 mg，3 mL。使用前用5 mL乙酸乙酯預處理，保持柱體濕潤。

12.2.4.4 儀器 與設備

液相色譜儀：配有紫外檢測器；分析天平：感量0.1 mg， 0.01 g；液體混勻器；固相萃取裝置；貯液器： 50 mL；高速冷凍離心機：最大轉速13000 r/min；刻度樣品管： 5mL，精度為0.1 mL；真空泵：最大真空度80 kPa； 振蕩器；具塞聚丙烯離心管； pH計：測量精度+0.02。

12.2.4.5 樣品前處理

(1)試樣制備

從全部樣品中取出有代表性樣品約1 kg，充分攪碎，混勻，均分成兩份，分別裝入潔凈容器內。

密封作為試樣，標明標記。在抽樣和制樣的操作過程中，應防止樣品受到污染或發生殘留物含量的變化。將試樣于-18℃冷凍保存。

(2)提取

稱取6g試樣，精確到0.01 g，置于50 mL具塞聚丙烯離心管中，加入20 mL Na2EDTA-Mcllvaine緩沖溶液，于液體混勻器上快速混合1 min，再用振蕩器振蕩10 min，10000 r/min離心10 min，上層提取液倒入另一具塞離心管中，殘渣中再加入15 mL Na2EDTA-Mcllvaine緩沖溶液，重復提取一次，合并提取液。鰻魚樣品的提取液中加入20 mL正己烷，振蕩5 min，以4000 r/min離心5 min，棄去正己烷相，水相部分待凈化。

(3)凈化

將提取液倒入下接Oasis HLB固相萃取柱的貯液器中，提取液以小于3 mL/min的流速通過固相萃取柱，待提取液完全流出后，用5 mL甲醇溶液洗柱，棄去全部流出液。固相萃取柱減壓抽干40 min，然后用15mL乙酸乙酯洗脫，下 接預先處理好的陽離子交換柱，調節流速小于3 mL/min，待乙酸乙酯全部流出后，取下Oasis HLB柱，用5 mL甲醇淋洗陽離子交換柱，棄去全部流出液。陽離子交換柱減壓抽干5 min，再用4 mL洗脫液洗脫，收集洗脫液于5 mL樣品管中，定容至4mL，過0.2 um濾膜后，供液相色譜紫外檢測器測定。

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