喹噁啉類藥物殘留測定方法——液相色譜-質譜法

時間：2023-03-24 23:57:49來源：food欄目：食品快速檢測閱讀：

喹噁啉類藥物殘留測定方法——液相色譜-質譜法

[db:作者] / 2022-12-21 00:00

(4)液相色譜-質譜法(liquid chromatography-mass spectrometry，LC-MS)

由于本類藥物的毒性，許多國家嚴格控制或禁止臨床應用，對檢測靈敏度提出了更高要求，而LC-MS檢測靈敏度高、特異性好，應用報道逐漸增多。喹嗯啉類藥物及其代謝物的LC-MS檢測主要采用電噴霧電離(ESI)方式，并可選擇正離子和負離子兩種監測模式；也有采用大氣壓化學電離(APCI)的測定方法報道。

1)APCI電離

Merou等采用LC-MS/MS測定豬、牛肌肉和豬肝中CBX、QCA和MQCA。色譜柱為ODS柱(150mm×4.6mm，5μm)，柱溫30℃，流動相為1%乙酸和1%乙酸甲醇溶液，梯度洗脫，流速0.7mL/min，采用APCI正離子掃描，毛細管電壓320℃，脫溶劑溫度450℃，放電電壓7μA，多反應監測模式(MRM)檢測。CBX、MQCA和QCA的CCa為0.09～0.24ug/kg，CCβ為0.12～0.41ug/kg，回收率為92%～101%(MQCA、QCA)和60%～62%(CBX)，CV小于12%。

2)ESI電離

A.負離子檢測

本類藥物的代謝物為酸性物質，LC-MS檢測可選擇負離子模式。我國國家標準GB/T22984-2008)檢測牛奶和奶粉中QCA和MQCA。采用ODS色譜柱(3um，100mm×2.1mm)分離，流動相為甲醇-乙腈以及0.1%甲酸，梯度洗脫，流速0.2mL/min，串聯質譜(MS/MS)在ESI負離子、MRM模式下檢測。牛奶和奶粉中平均回收率為68.2%～82.5%，RSD為3.4%～12%；牛奶中LOQ均為0.5μg/kg，奶粉中均為4.0ug/kg。Sniegocki等測定豬肉中CBX及其代謝物BDCBX和QCA、OLQ及其代謝物MQCA，采用QCA-d4為內標，LC-MS/MS測定。色譜柱為Luna C8(100mm×2mm，3um)，保護柱為C8(4mm×2mm，3um)，流動相為0.5%異丙醇-1%乙酸溶液和甲醇，梯度洗脫，柱溫25℃，流速0.4mL/min，ESI負離子，毛細管電壓-4500V，脫溶劑溫度400℃，檢測器增益電壓2100V，

MRM模式檢測。方法CCa為1.04～2.11μg/kg，CCβ為1.46～2.89μg/kg，回收率為99.8%～101.2%。質譜測定QCA和BDCBX時表現為基質抑制，MQCA為基質增強，而采用同位素內標校正后，測定更為準確。

B.正離子檢測

相比負離子檢測，采用正離子模式檢測的報道更多。檢測正離子時，流動相中可加酸來提高檢測靈敏度

Hutchinson等用LC-MS/MS檢測豬肝中QCA，色譜柱為C18(150mm×4.60mm，5μm)，流動相為甲醇-水-乙酸(40+59.6+0.4，v/v)，流速1.0mL/min，分流0.2mL/min，質譜ESI正離子，MRM檢測。離子源溫150℃，干燥氣和霧化氣均為氮氣，流速分別為500 L/h和80 L/h。方法回收率為89%～111%，CV為0.15%～10%，CCa 和CCβ分別為0.16μg/kg和0.27μg/kg。Horie等用LC-MS/MS測定豬肉和肝臟中CBX、BDCBX、QCA，采用C18色譜柱(100mm×3.0mm，2.6um)，流動相為甲醇、乙腈以及0.2%甲酸，梯度洗脫，流速0.30mL/min，ESI正離子掃描，MRM模式監測。QCA的回收率為70.2%～86.3%，LOQ 為1μg/kg。

Zhang等建立了魚肉組織中OLQ代謝物MQCA的超高效液相色譜(UPLC)-ESI+-MS/MS殘留分析方法。色譜柱為UPLC BEH C18(2.1mm×50mm，1.7mm)，柱溫40℃，流動相為甲醇和0.3%甲酸溶液，梯度洗脫，流速0.3mL/min，進樣體積10μL，ESI 正離子掃描，源溫120℃，脫溶劑溫度380℃，毛細管電壓3.5kV，錐孔電壓25V，錐孔氣流速60L/h，去溶劑氣流速600L/h，錐孔氣和碰撞氣分別為高純氮氣和氬氣。每個樣品用時間小于5min，LOD和LOQ分別為0.1和0.25ng/g，回收率為92.7%～104.3%，RSD小于6%。呂海鸞等測定畜產品和水產品中OLQ的殘留標示物MQCA殘留，用UPLC-MS/MS確證和定量。色譜柱為ACQUITY BEH C18 (50 mm×2.1 mm)，進樣量10uL，流動相為0.1%甲酸和0.1%甲酸甲醇溶液，梯度洗脫，流速0.3mL/min，ESI正離子掃描，毛細管電壓2.8kV，離子源溫度150℃，脫溶劑溫度300℃，碰撞氣氬氣，脫溶劑氣流速為480L/h， MRM模式監測，采用外標法定量。MQCA的LOD為0.90～1.8μg/kg，LOQ為3.0～6.0μg/kg，平均回收率均在73.6%～89.0%之間，日內RSD在15%以下，日間CV低于20%。劉正才等采用LC-MS/MS測定動物源食品中OLQ代謝物MQCA殘留量。色譜柱為Kinetex C18柱(100mm×3.0mm，2.6um)，流動相為甲醇、乙腈以及0.2%甲酸，梯度洗脫，流速0.30mL/min，柱溫35℃，進樣量20μL，ESI正離子掃描，MRM模式監測，電噴霧電壓4500V，氣簾氣壓力0.172 MPa(氮氣)，離子源溫度550℃，霧化氣壓力0.379MPa，輔助氣壓力0.379 MPao MQCA的LOQ分別為：鰻魚0.4 μg/kg、蝦0.3 μg/kg、豬肉0.5μg/kg、雞肉0.3ug/kg、牛肉0.5 ug/kg、豬肝0.5 ug/kg，遠低于國內外對MQCA的MRLs規定，回收率在60.7%～107%之間，RSD在4.59%～14.9%之間。

Hutchinson等建立了豬肝中QCA和MQCA的LC-ESI-MS/MS確證方法。色譜柱為C18柱(150mm×2.0mm)，流動相為甲醇-乙腈-水-乙酸(10+10+79.6+0.4，v/v)，流速0.2 mL/min，進樣體積15μL，質譜源溫150℃，ESI+掃描，MRM檢測QCA產物離子m/z 102和75，MQCA產物離子m/z145和102，采用穩定氘代同位素內標定量。QCA的CCa和CCβ分別為0.4μg/kg和1.2μg/kg， MQCA分別為0.7μg/kg和3.6μg/kg。Boison等用LC-MS/MS測定豬組織中CBX和OLQ及其代謝物QCA和MQCA殘留。色譜柱為Nova-Pak C18 (2.1mm×150mm，4um)，流動相為0.04%甲酸-甲醇，梯度洗脫，流速0.2mL/min，分流，進入質譜流速為0.08 mL/min，ESI 正離子、MRM檢測，毛細管電壓2.75kV，錐孔電壓27V，源溫100℃，脫溶劑溫度150℃。BDCBX和QCA的LOQ分別為0.05μg/kg和0.5μg/kg，LOD分別為0.025μg/kg和0.3ug/kg；MQCA的LOQ為0.5μg/kg，LOD 為0.3μg/kg；回收率在80%～120%。

Zeng等開發了一種快速測定豬肌肉、肝臟、腎臟中MQX的5個代謝物的LC-MS/MS方法。樣品經酸水解，用SPE凈化后，進LC-MSMS在ESI正離子源下測定。滿足確認所需的兩對轉化離子，以及可接受的相對離子強度。方法CCa在0.6～2.9μg/kg之間，CCβ介于1.2～5.7μg/kg；回收率為75.3%～107.2%，RSD小于12%。Liu等報道了采用超高效液相色譜-串聯質譜(UPLC-MS/MS)測定豬肝臟中MQX及其代謝物(l-desoxymequindox和BDMQX)的方法。用酸性乙腈提取，Oasis MAX柱凈化后，通過UPLC分離，用含0.1%甲酸的甲醇進行梯度洗脫，色譜分析總時間少于8min。ESI-MS/MS在MRM模式下進行數據采集。在2～100μg/kg的添加水平下，方法回收率范圍為80%～85%，日內CV小于等于14.48%，日間CV小于等于14.53%；LOD范圍為0.58～1.02μg/kg，LOQ范圍為1.93～3.40ug/kg。

C.正負離子切換檢測

還可以通過質譜電離方式切換，同時檢測正負離子。Horie等建立了檢測豬肌肉和肝臟中CBX及其代謝物QCA和BDCBX的方法。色譜分離采用Cadenza CD-C18柱(10cm×2mmid.)，流動相為0.01%乙酸-乙腈，梯度洗脫，流速0.2mL/min，LC-ESI-MS測定，SIM模式監測(QCA檢測[M-H]，BDCBX檢測[M+H]+)。檢測濃度在0.01～0.5ng時，呈良好線性，回收率為70.2%～86.3%，LOD均為1ng/g。

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